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      冰凍切片免疫熒光實驗

      發布日期:2024-01-11 17:20:11   瀏覽量 :9
      發布日期:2024-01-11 17:20:11  
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      1、冰凍切片固定

      冰凍切片37℃烘烤10至20分鐘,控干水分,置于4%多聚甲醛固定30min。于PBS緩沖液中晃動洗滌3次,每次5分鐘。

      2、抗原修復

      將切片浸沒在升滿EDTA抗原修復緩沖液(PH8.0)的修復盆中,置于微波爐內進行抗原修復,修復條件:中火8min至沸——?;?min保溫——中低火7min(整個過程需防止修復液過度蒸發,切勿干片。

      自然冷卻后,將切片置于PBS緩沖液中。然后在搖床上,晃動洗滌3次,每次5min。

      3、畫圈血清封閉

      切片稍甩干后,用組化筆在組織周圍畫圈,滴加組織自發熒光淬滅劑A液,室溫孵育30min,純水洗5分鐘,接著滴加BSA牛血清白蛋白,封閉30min。

      4、加一抗

      輕輕甩掉封閉液,在切片上滴加按比例配好的一抗后,切片平放于濕盒內4℃孵育過夜,這里推薦使用生科云選一抗實驗效果更佳。

      5、加二抗

      切片浸沒在PBS緩沖液中,然后在生科云選搖床上,晃動洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后,滴加生科云選熒光二抗,覆蓋組織,避光室溫孵育50min。這里推薦使用生科云選二抗實驗效果更佳。

      6、DAPI復染細胞核

      切片浸沒在生科云選PBS緩沖液中,晃動洗滌3次,每次5min。甩干后,在圈內滴加生科云選即用型DAPI染液,避光室溫孵育10min。

      7、淬光組織自發熒光

      切片置于生科云選PBS緩沖液中,晃動洗滌3次,每次5min。在圈內滴加生科云選組織自發熒光淬滅劑B液,避光室溫孵育5min,水洗10min。

      8、封片

      切片稍甩干后用生科云選抗熒光淬滅封片劑封片,推薦使用生科云選配套試劑、耗材、儀器,實驗效果更佳!

      冰凍切片免疫熒光結果判讀:

      DAPI染出來的細胞核在紫外的激發下為藍色,陽性表達為相應熒光素標記的紅光或綠光等。

      *以上內容來自網絡

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